ROSE CRYSTA-70の美白効果を評価するためにチロシナーゼ阻害作用、マウスメラノーマ細胞を用いたメラニン生成抑制作用について調べた。
その結果、ROSE CRYSTA-70は、チロシナーゼ阻害作用と細胞中メラニン生成抑制作用を示した。また、ROSE CRYSTA-70のポリフェノール成分であるオイゲニインでは、アルブチンよりも強いチロシナーゼ阻害作用を示した。
これらのことから、ROSE CRYSTA-70には美白効果があり、オイゲニインがその有効成分のひとつであることが示唆された。

＜試験方法＞ 日本化粧品工業会連合会の規定で、肌タイプがⅡあるいはⅢに分類される20歳以上40歳未満で、コルネオメーターで測定した皮膚の水分値が低めかつたるみが気になる女性30名を被験者とし、投与群15名にはROSE CRYSTA-70 100mg/カプセル×朝夕２回、非投与群15名にはROSE CRYSTA-70を含まないカプセル×朝夕２回を、それぞれ８週間摂取した。被験者および検査者は、どの被験物質を摂取したか分からない状態で試験を行なった（二重盲検試験）。試験開始後３週目に1.5MED（1MEDは最小紅斑紫外線照射量；皮膚が赤くなる紫外線の最小量）の紫外線を照射し、24時間後、１週後（摂取開始後4週目）、３週後（同６週目）、５週後（同８週目）に分光測色計により測定した。

＜結果＞ メラニン生成の指標となるb*値が、非投与群と比較して投与群では全体的に低く抑えられることが確認された。特に紫外線照射１週間後（摂取４週目）においては、有意に抑えられた。このことは、ROSE CRYSTA-70を摂取することで、紫外線照射時のメラニンの生成を抑え、肌を白く保つ効果があることを示している。

① VISIA画像解析

＜試験方法＞ 皮膚画像解析装置（VISIA Evolution）を使用して被験者の左顔を撮影した後、各項目におけるVISIAスコア変化量（【測定時のスコア】－【摂取前(０週目)のスコア】）を算出した。なお、VISIAスコアは低いほど良好な状態を示すことから、スコア変化量が低いほど肌状態が改善していることを意味する。

＜結果＞ 試験群では赤い部分、シワ、茶色シミ、キメの項目においてプラセボ群よりも改善した。特にシワ、茶色シミ、キメにおいては、摂取前の０週目と比較して各測定ポイントにおける有意な改善を示し、またプラセボ群との比較においては、赤い部分、シワ、茶色シミの項目でそれぞれ摂取８週後、４週後、８週後で有意な改善が確認された。
なお、摂取４週後から８週後（11月末～12月末）にかけては、急な気温低下や乾燥等の影響でシワやキメのスコアが一時的に上昇したが、それでも試験群ではプラセボ群よりも低値を示した。
以上の結果から、ROSE CRYSTA-70の摂取によりシワ、シミ、肌荒れの抑制、またキメを整える効果が期待される。

真皮にはⅠ型コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸などの細胞外マトリックスとよばれる成分があり、これらは線維芽細胞が産生する酵素により分解される。Ⅰ型コラーゲンを分解するマトリックスメタロプロテアーゼ-1（MMP-1）は、少量の紫外線によってもそのタンパク量が増加し、活性が亢進される。したがってMMP-1の活性やmRNA産生が抑えられることで、コラーゲンの分解が抑えられ、シワを抑え、ハリを保つなどの効果が期待できる。
線維芽細胞に紫外線A波（UV-A）を照射することで、MMP-1の活性とmRNAの発現が増加する。その際、MMP-1の活性を抑えることが知られているレチノイン酸を添加するとMMP-1活性、mRNA産生とも減少した。ROSE CRYSTA-70（最終濃度1.0μg/mL）では、レチノイン酸よりも強く抑制し、UV-Aを照射しない状態よりも活性、産生とも低くなった。これらのことから、ROSE CRYSTA-70には、MMP-1の活性と発現を強く抑えることが示された。この結果、コラーゲンの分解を抑えられ、シワを抑え、肌のハリを保つことが示唆された。

＜試験方法＞ 日本化粧品工業会連合会の規定で、肌タイプがⅡあるいはⅢに分類される20歳以上40歳未満で、コルネオメーターで測定した皮膚の水分値が低めかつたるみが気になる女性30名を被験者とし、投与群15名にはROSECRYSTA-70 100mg/カプセル×朝夕２回、非投与群15名にはROSE CRYSTA-70を含まないカプセル×朝夕２回を、それぞれ８週間摂取した。被験者および検査者は、どの群の被験物質を摂取したか分からない状態で試験を行なった（二重盲検試験）。試験開始前と４週間後、８週間後に、キュートメーターにより肌（左頬）における弾力性の指標（R2値）の測定を行なった。

＜結果＞ R2値において、投与群は非投与群より上昇し、８週間後には投与群においてのみ摂取後の有意な改善が確認された。このことは、ROSE CRYSTA-70を摂取することで、紫外線によるコラーゲンの分解が抑えられ、さらに後述する血糖値上昇抑制作用による糖化ストレス防止効果によってコラーゲン劣化が抑えられたことが推測できる。

真皮には、Ⅰ型コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸などの細胞外マトリックスとよばれる成分があり、これら成分により肌のハリや弾力、瑞々しさが保たれシワができにくい肌状態が維持される。これら細胞外マトリックス成分は線維芽細胞により合成されるが、一方で線維芽細胞が産生する酵素により分解される。これら細胞外マトリックス成分の合成分解のバランスの変化が、皮膚のシワやたるみの原因のひとつとして考えられている。
本試験では、ROSE CRYSTA-70の抗シワ作用を評価するために細胞外マトリックス成分の分解酵素阻害作用について調べた。
その結果、ROSE CRYSTA-70は、Ⅰ型コラゲナーゼ、ヒアルロニダーゼ及びエラスターゼのいずれに対しても阻害作用を示した。このことからROSE CRYSTA-70は、細胞外マトリックスの分解を抑制することで肌のハリや弾力、瑞々しさを維持し、その結果としてシワ形成を抑えることが期待できる。

①米飯摂取試験

対照群：

米飯（サトウのご飯）200g

試験群：

米飯（サトウのご飯）200g ＋ ROSE CRYSTA-70；100mg

被験者は５名とし、摂取前と摂取30、60、120分後において血糖値を測定した。試験デザインは両群のクロスオーバー試験とした。
ROSE CRYSTA-70の摂取により、摂取30分後において血糖値の上昇が抑えられ、糖の吸収が抑制されることが明らかになった。

②ショ糖摂取試験

対照群：

ショ糖；30g/300mL水

試験群：

（ショ糖；30g ＋ ROSE CRYSTA-70；50mg）/300mL水

上記被験物質を５分かけて摂取し、摂取30、60、90、120分後において血糖値を測定した。被験者は７名とし、試験デザインは、両群のクロスオーバー試験とした。
ROSE CRYSTA-70の摂取により、摂取30分後および60分後において血糖値の上昇が抑えられ、糖の吸収が抑制されることが明らかになった。

リパーゼ阻害作用は、オリーブオイル10%、Tween20 1% 乳化溶液を基質とし、豚由来リパーゼを用いて反応させ、生成された遊離脂肪酸を「NEFA C-テストワコーキット」を用いて測定することにより評価した。各試料は終濃度10ppmとなるように反応系に添加して反応させた。
その結果、ROSE CRYSTA-70にリパーゼ阻害作用のあることが確認された。その他植物由来のポリフェノールを含む抽出物との比較においても、高い作用を示したことから、ROSE CRYSTA-70は、脂肪吸収抑制の効果が期待される。

＜試験方法＞ 健康な成人７名（30〜50歳代、男性５名、女性２名）に高脂肪食のみを摂取した場合（対照群）、ROSE CRYSTA-70 200mgを同時に摂取した場合（試験群）において、血中中性脂肪（TG）の変化を測定した。

＜結果＞ 全体として、ROSE CRYSTA-70を摂取時（試験群）は、非摂取時（対照群）と比較して、血中中性脂肪が低く抑えられた。これらの曲線下面積（AUC）は、吸収された中性脂肪量に比例するが、ROSE CRYSTA-70摂取時は、非摂取時と比較して64%に抑えられたことがわかった。このことは、脂肪を摂取した際に約３分の１の脂肪が吸収されなかったことを示しており、メタボリックシンドロームの予防や、ダイエットなどに効果がある可能性を示唆している。

＜結果②：体脂肪への影響＞ 試験飼料投与期間終了後に解剖し、脂肪組織重量および肝臓脂質について測定した結果を図C、D及びEに示す。 ROSE CRYSTA-70投与により、体内の脂肪組織重量は精巣上体、腸間膜、腎周囲および皮下部のいずれにおいても有意に減少し（図D）、総脂肪組織重量として顕著な減少（図C）が確認された。また、肝臓においても総脂質が有意に減少し、これは主に中性脂肪の有意な減少によるものであることが確認された（図E）。
以上のことから、ROSE CRYSTA-70は、高脂肪食摂取による体脂肪の蓄積を防止することが確認された。

＜試験方法＞ 過去の血液検査結果より脂質成分である中性脂肪、総コレステロールおよびLDLコレステロールのいずれかが基準値より高い５名（男性、30〜60歳代）を被験者とし、ROSE CRYSTA-70の連続摂取による血中脂質成分への影響について調べた。ROSE CRYSTA-70摂取量は100mg/日（夕食前）、摂取期間は23週間とした。

＜結果＞ ROSE CRYSTA-70の連続摂取により、血液中中性脂肪（A）、総コレステロール（B）およびLDLコレステロール（C）はいずれも低下する傾向が確認された。また、LH比*（D）も低下することが確認された。
このことは、ROSE CRYSTA-70を連続摂取することにより、脂質異常症の予防、メタボリックシンドロームの予防やダイエットなどの効果が期待される。

＊LH比：LDLコレステロール（悪玉）とHDLコレステロール（善玉）の比。LDL値およびHDL値のどちらとも基準値範囲内であっても、心筋梗塞を起こす例が非常に多いことから、脂質異常症の診断において最近、両者の比=「LH比」が重視されている。LH比が2.0を超えると動脈硬化が疑われ、2.5を超えると血栓ができている可能性があり、心筋梗塞のリスクも高いことが指摘されている。

ROSE CRYSTA-70の⻭周病菌（Porphyromonas gingivalis）およびう蝕（⾍⻭）の原因菌（Streptococcus mutans）に対する抗菌性を評価するために最小発育阻止濃度（MIC）を測定した。試験方法は日本化学療法学会法(1981)寒天平板希釈法を参考にして検体の最小発育阻止濃度を測定した。すなわち、検体を任意濃度添加した寒天平板培地に試験菌の菌液を塗抹培養後、発育が阻止された最低濃度をもって最小発育阻止濃度とした。
その結果、ROSE CRYSTA-70は、P. gingivalis、S. mutansのどちらに対しても抗菌性を示すことが確認された。
このことから、ROSE CRYSTA-70は、口腔ケア用途への応用も期待できる。

上述のように内皮細胞由来の血管拡張因子の代表的なものが一酸化窒素（NO）である。NOは内皮細胞中のNO合成酵素の働きでアルギニンからつくられ放出される。 血管平滑筋細胞に到達したNOはグアニル酸シクラーゼを活性化してcGMPの産生を促進し、血管拡張を引き起こす。
ROSE CRYSTA-70は、内皮細胞からの血管拡張因子NOの放出を誘発することが確認された。

＜結果＞ PE処理によって収縮した血管にROSE CRYSTA-70を添加すると、その濃度上昇に伴って血管の張力が減少（＝拡張）していくことが確認された（A）。
しかし、内皮を除去した血管およびL-NAME処理によりNOの発生を阻害した血管では、ROSE CRYSTA-70による血管拡張作用は顕著に抑制された（B）。
また、平滑筋で生成されるcGMP量について調べたところ、ROSE CRYSTA-70添加によりcGMP生成量は増加した。そしてこのROSE CRYSTA-70によるcGMP産生促進効果は、L-NAME処理により抑制された（C）。
すなわち、ROSE CRYSTA-70には血管拡張作用があり、そのメカニズムの１つとして内皮細胞からのNOの放出を誘発することが確認された。

以上のことから、ROSE CRYSTA-70は血管内皮機能の改善を介して動脈硬化、高血圧、脳卒中や心筋梗塞などの血管・血流が関与する生活習慣病の予防素材として期待できる。

＜結果＞ 皮膚温度回復率を評価した結果、被験者全員を対象とした２群間の比較では有意な差は認められなかった。そこで、０週目における皮膚温度回復率が低い被験者（皮膚温度回復率が50%未満）を対象としたサブグループ解析を行った結果、 試験群では親指、人差指、中指において０週目と比較して、皮膚温度回復率が摂取４週目以降から有意に上昇し、12週目においては全指において有意な上昇が確認された。また、中指においてはプラセボ群と比較して有意な高値を示した。

ROSE CRYSTA-70には血管内皮細胞からのNO放出を誘発することによる血管拡張作用が確認されている。本試験における皮膚温度回復率の上昇は、ROSE CRYSTA-70の血管拡張作用により、末梢部分への血液の流れが改善したことが考えられる。また、血管は手や足の指先だけでなく、右図下図にあるように皮膚真皮層の網状層から乳頭層へも上行しており、表皮層への栄養供給や老廃物の受け取りなどの役割も担っていることから、ROSE CRYSTA-70の血流改善効果によって肌への有用な効果も期待できる。